Проблема разработки эффективных, надежных, хорошо воспроизводимых методов получения регенерантов в культуре листовых дисков и иных комплексных эксплантов остается важной и актуальной для различных областей растениеводства, таких, как селекция и размножение растений, вирусология, генетика и физиология. В своих экспериментах мы изучали регенерацию in vitro целых растений из листовых дисков и отрезков междоузлий ежевики (Rubus sp.) и малины красной (Rubus idaeus). Было продемонстрировано, что использование отрезков междоузлий обеспечивало самый высокий уровень регенерации побегов по сравнению с культурой листьев и листовых дисков, для культуры изолированных пыльников был характерен самый низкий. Частота каллусообразования у культивируемых пыльников зависела от фазы развития пыльцы. Для увеличения выхода регенерантов в культуре листовых дисков была проведена оптимизация состава питательной среды по концентрации препаратов с ауксиновой и цитокининовой активностью. Было установлено, что предварительное культивирование листовых дисков в условиях пониженной освещенности увеличивало частоту регенерации. Аналогичного эффекта можно было добиться, нанося поранения на листовые пластинки в зоне центральной жилки. Частота регенерации была связана с видовыми и сортовыми особенностями растений, составом питательной среды и условиями культивирования. Разработанные приемы могут быть использованы в работах по генетической инженерии, вирусологии, сомаклональной селекции, размножению растений, включая создание искусственных семян.
The problem of working out effective, reliable, reputable technique for regenerants obtaining in leaf discs and others complex explants is very actual and important for different fields of plant science such as plant breeding, virology, plant propagation, genetic and physiology. In our experiments in vitro regeneration of whole plants from the leaf discs, leaves and intermodal segments of blackberry (Rubus sp.), and red raspberry (Rubus idaeus) has been studied. It was shown that the intermodal segments provided the highest level of shoot regeneration in comparison with leaf discs and leaves culture. Anther culture was characterized by lowest rate of shoots regeneration. The rate of callus formation in isolated anther culture depended on the stage of pollen grain development. For increasing of regenerants output in leaf discs culture the optimization of nutrient media components as far as auxins and cytokinins concentration was carried out; it was also established that leaf discs explants precultivation on low level illumination provided increasing of rate regeneration. The same effect could be obtained by means of wounding of leaf blade. In general the rate of regeneration depended on species and varieties peculiarities, nutrient media composition, cultivation conditions. The worked out techniques can be used for genetic engineering and virology investigation, somaclonal selection, plant propagation including “artifi cial seeds” creation.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.